临床分子生物学检验技术实验指导+2

内容简介

本书是高等医药院校医学检验技术专业创新型系列教材，是《临床分子生物学检验技术》的配套教材。 本书主要介绍临床分子生物学实验室基本知识、检验基本技能实验、检验综合实验、检验创新实验设计。 本书可供医学检验技术等专业使用。

目录

章 临床分子生物学检验技术实验基本知识 节 临床分子生物学检验技术实验室管理规程 节 临床分子生物学检验技术实验操作基本知识 第三节 实验操作技能学与考评章 临床分子生物学检验技术基本技能实验 节 核酸的分离与纯化 实验一 质粒DNA的提取与纯化 实验二 基因组DNA的分离与纯化 实验三 RNA的提取与纯化 节 核酸的鉴定与分析 实验四 紫外吸收法鉴定核酸的浓度和纯度 实验五 核酸浓度荧光微量检测 实验六 核酸片段的琼脂糖凝胶电泳 实验七 核酸片段的聚丙烯酰胺凝胶电泳 第三节 聚合酶链式反应技术 实验八 常规PCR检测方法 实验九 RT-PCR检测方法 实验十 实时荧光定量PCR检测方法 第四节 印迹技术 实验十一 Southern blot技术 实验十二 Northern blot技术 实验十三 Western blot技术 第五节 生物芯片技术 实验十四 基因芯片 实验十五 蛋白质芯片 第六节 核酸测序技术 实验十六 双脱氧链终止测序法 实验十七 焦磷酸测序法 实验十八 高通量测序法 第七节 生物信息分析技术 实验十九 引物设计方法 实验二十 序列比对分析 实验二十一 分子系统发育分析 实验二十二 基能与通路分析 第八节 分子克隆技术 实验二十三 感受态细胞的制备 实验二十四 DNA重组与转化 实验二十五 重组子的筛选与鉴定 实验二十六 重组基因的诱导表达与检测第三章 临床分子生物学检验技术综合实验 节 感染疾病的临床分子生物学检验 实验二十七 病毒(HBV)基因定量检测 实验二十八 甲型流感病毒(H1N1)基因定检测 实验二十九 人乳头瘤病毒(HPV)基因分型检测 实验三十 结核分枝杆菌的检测 节 遗传疾病的分子生物学检验 实验三十一 地中海贫血基因检测 实验三十二 肌营养不良相关基因检测 实验三十三 强直脊柱炎基因检测 实验三十四 遗传耳聋相关基因检测 第三节 疾病的临床分子生物学检验 实验三十五 Her2基因表达分析 实验三十六 EGFR基因突变检测 实验三十七 白血病融合基因BCR-ABL的检测 实验三十八 循环细胞检测 第四节 基因的临床分子生物学检验 实验三十九 华法林代谢基因检测 实验四十 叶酸代谢基因检测 第五节 个体遗传标记和染色体异常的临床分子生物学检验 实验四十一 STR基因座分型 实验四十二 HLA基因分型 实验四十三 21三体异常的分子诊断第四章 临床分子生物学检验技术创新实验 实验四十四 流感病毒分子流行病学分析 实验四十五 荧光定量PCR高分辨率熔解曲线分析检测基因点突变 实验四十六 荧光素酶报告基因的制备附录 常用试剂与缓冲液的配制主要参考文献彩图

摘要与插图

章临床分子生物学检验技术

实验基本知识

开展临床分子生物学检验技术实验的目的旨在巩固学生所学的基础理论知识，使其对临床分子生物学检验技术有一个基本的认识，培养学生的观察能力、综合分析能力，以及独立工作的能力。为保证实验教学的和有效，每一入实验室的学生，学一课是岗前培训，其目的是熟悉实验室管理制度，学基本知识，了解实验目标和方法。

节;;临床分子生物学检验技术实验室管理规程

为确保临床分子生物学检验技术操作质量和实验结果的，防止实验污染、减少检验医学差错与事故的发生，实验室均会制定一套完整的实验室管理制度和程序，以规范检验人员的各种行为。本节仅介绍部分与教学相关的实验室管理规程。

一、学生实验守则

(pan style="font-family:宋体">学生应按教学计划和课程表安入实验室上课。实验前必须预指导和相关理论，明确实验目的、原理、预期结果、关键步骤及注意事项等。

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(3)实验时要精心使用仪器设备，严格遵守操作规程。实验前应按要求做好准备，熟悉贵重仪器的使用方法，认真检查仪器，禁止随意移动；经指导教师许可后方可接通电源、气源，启动设备；爱护仪器设备，因违反操作规程而损坏仪器设备者要赔偿。

(4)实验操作时，应严肃认真、专心操作，节约药品、试剂、蒸馏水、煤气、电等；保持实验台面整洁，试剂、仪器应按要求整齐放置，无用物品不要放在实验台上，公用物品用后放回原处，不得私自占有。

(5)注意观察实验过程中出现的现象和结果，及时、如实记录所有实验数据，必要时请老师当场审核。不得随意杜撰和拼凑数据，结果不良时，必须重做。

(6)注意操作，避免事故。使用乙醚、苯、乙醇等易燃有机溶剂时，须远离火源，严禁直接在电炉、酒精灯上加热。如有火险发生应先关电源。有机溶剂着火时，勿用水浇泼，以免扩大燃烧面积，可用砂土或灭火器灭火。凡强酸、强碱及有毒液体，勿用口吸；吸取此类物品的吸管等不准乱甩，以免伤人；试管内容物加热时管口不要对着人。

(7)实验过程中，仪器设备发生故障或损坏时，首先要切断电源、气源，并立即报告指导教行处理。

(8)实验操作完成后，须将试剂瓶排列整齐，整理好公用物品；固体废物(如滤纸、玻璃纸、棉花、血块等)不要倒入水池，以免堵塞水管；一般废液可倒入水池中冲走，但强酸、强碱等有害溶液必行化处理；各类器皿按要求清洗干净并收好；擦净实验台，请指导老师检查允许后方可离开。

(9)实验结束后，根据实验结行科学分析与处理，按要求完成实验报告，并及时交老师;;审阅。

二、实验室管理制度

(pan style="font-family:宋体">要牢固树立意识，坚持“以人为本，，为主”的原则。一切工作首先要保障人身，认真做好实验室的防护工作，经常对师生员行教育，克服麻痹大意思想，采取有力措施，防火、防盗、防事故，切实保障师生员工和实验室的。

(2)非实验室有关人员不得随入实验室。外来参观人入实验室要经主管负责人同意，由专人陪同；参观时不要妨碍实验室教学工作的正行。节假日和晚间需做实验时，必须经实验室主任同意，并少有二人以上同时工作。

(3)所入实验室工作和学员，必须服从管理人员的安排，遵守实验室有关规章制度和规程，不得违规操作或擅离职守。未经实验室或设备管理人员同意不得擅自动用实验室的设备、设施，否则一旦发生事故，相关责任人需承担相应责任。

(4)做到文明实验入实验室应保持安静，不得将与实验无关的物品实验室，不准存放私人物品。不得吸烟、饮食、随地吐痰、乱扔纸屑和其他杂物。

(5)实验后和下班前应搞好仪器设备和场地环境的整理，做好电、水、气、化学药品及门窗的检查，确认无误后，方可离开实验室，防止发生事故。

(6)实验室内不得擅自拉接电线、改装电路、增加电器设备，所有仪器设备的电线、插头、插座和接线板必须符合用电要求，若有损坏，及时报修。实验室严禁非工作用电炉。因教学、科研需要须经员同意。使用时要注意，停电或停用后要及时切断电源。

(7)严格执行化学危险品、剧、的领用、保存及使用相关规定，不准随便丢弃、倾倒易燃易爆化学药品及其废液，禁止往水槽内倒入容易堵塞的杂物和强酸、强碱及有毒的有机溶剂。

(8)消防器材要放在明显和便于取用的位置，周围不准堆放杂物。要经常检查保证其有效可靠。严禁将消防器材移作他用。保持室内外走道畅通，严禁占用走廊堆放物品。

(9)对违章操作，忽视而造成火灾、污染、中毒、人身重大伤害、精密贵重仪器和大型设备损坏等重大事故时，实验室工作人员要立即抢救，保护好事故现场，及时按规定上报有关部门。对隐瞒不报或拖延上报者，应按有关规定予以从严处理。三、实验室应急预案

(一)实验室火灾应急处理预案

(pan style="font-family:宋体">发现火情·现场工作人员立即采取措施处理，防止火势蔓延并迅速报告。

(2)确定火灾发生的位置，判断出火灾发生的原因，如压缩气体、液化气体、易燃液体、易燃物品、自燃物品等。

(3)明确火灾周围环境，判断是否有重大危险源分布及是否会带来次生灾难。

(4)明确救灾的基本方法，并采取相应措施，按照应急处置程序，采用适当的消防器行扑救。①木材、布料、纸张、橡胶以及塑料等的固体可燃材料的火灾，可采用水冷却法，但对珍贵图书、档案应使用二氧化碳、卤代烷、干粉灭火剂灭火；②易燃可燃液体、易燃气体和油脂类等化学药品火灾，使用大剂量泡沫灭火剂、干粉灭火剂将液体火灾扑灭；③带电电气设备火灾．应切断电源后再灭火，因现场情况及其他原因，不能断电．需要带电灭火时，应使用沙子或干粉灭火器，不能使用泡沫灭火器或水；④可燃金属·如镁、钠、钾及其合金等火灾，应用特殊的灭火剂，如干砂或干粉灭火器行灭火。

(5)依据可能发生的危险化学品事故类别、危害程度级别，划定危险区，对事故现场周边区行隔离和疏导。

(6)视火情拨打“n9”报警求救，并到明显位置引导消防车。......