内容简介
《食品微生物检验实验》系统地研究与食品有关的微生物的检测原理和方法括食品企业生产过程中水的卫生检测、空气中微生物的检测以及食品企业加工设备、用具的细菌检验技术;食品中菌数、大肠菌群的检测、食品中霉菌和酵母菌的检测,食品中常见病原微生物的检测技术;以及现代食品检测新技术、新方法,如聚合酶链反应(PCR)技术、测技术(抗原-抗体反应免疫凝结试验、免疫电泳技术、免疫荧光技术和免疫磁珠技术免疫酶技术),核酸分子杂交技术等。
目录
前言
章微生物的生物化学实验技术
实验一碳源代谢实验
实验二氮源代谢实验
实验三碳源和氮源利用实验
实验四酶类实验
实验五实验
实验六其他实验
思考题
章食品中微生物指标常规检测
实验七食品中菌数的测定
实验八食品中大肠菌群的计数
实验九食品中霉菌和酵母菌的计数
思考题
第三章食品中常见病原微生物检测技术
实验十食品中沙门氏菌检验
实验十一食品中志贺氏菌检验
实验十二食品中金黄色葡萄球菌检验
实验十三食品中致泻大肠埃希氏菌检验
实验十四食品中溶血链球菌检验
实验十五食品中蜡样芽孢杆菌检验
实验十六食品中副溶血弧菌检验
实验十七食品中产气荚膜梭菌检验
实验十八食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌检验
实验十九食品中肉毒梭菌及肉毒毒素检验
实验二十食品中空肠弯曲菌检验
实验二十一食品中肠球菌检验
实验二十二食品中单核细胞增生李斯特菌检验
实验二十三 食品中阪崎肠杆菌检验
实验二十四 食品中大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验
思考题
第四章食品企业的卫生微生物检验
实验二十五 食品用水卫生微生物检验
实验二十六空气中的细菌检验
实验二十七食品企业加工设备、用具的细菌检验
实验二十装材料的微生物检验思考题
第五章各类食品的微生物检验
实验二十九罐头食品的商业无菌检验
实验三十鲜乳中抗生素残留量检验
实验三十一食品中乳酸菌检验…思考题
第六章食品的微生物现代检测新技术
实验三十二聚合酶链反应(PCR)技术
实验三十三实时荧光定量PCR
实验三十四测技术
实验三十五核酸分子杂交技术
实验三十六生物芯片检测技术
思考题
主要参考文献
附录;食品微生物检验实验常用染色液、培养基和试剂
摘要与插图
章生物的生物化学实验技术
【内容提要】
本章主要介绍了微生物检测基本技术中的生物化学实验技术。解释了各个生化反应的原理和应用范国,着重阐明了各个生化实验所涉及的实验培养基和试利、换作方法及结果利定方法。
【实验教学目标】
1.通过本章实验加深对细菌生化反应原理和意义的理解;
2.掌握常规细菌生化实验的操作方法。
【重要概念及名词】
生化实验
从化学的观点来看,微生物细胞的化学成分以有机物和无机物两种状态存在。有机含各种大分子,它们是蛋白质、核酸、类脂和糖类,占细胞干重的9%:无机括小分子无机物和各种离子,占细胞干重的1%。微生物细胞的元素构成由C、H、O、N、P、S、K、Na、Mg、Ca、Fe、Mn、Cu、Co、Zn、Mo等组成,其中C、H、O、N、P、S六种元素占微生物细胞干重的97%,其他为微量元素。微生物细胞的化学元素组成的比例常因微生物种类的不同而异。组成微生物细胞的化学元素分别来白微牛物牛长所需要的营养物质,即微生物生长所需的营养物质应含组成细胞的各种化学元素。这些物质为提供构成细胞物质的碳源物质、构成细胞物质的氮源物质和一些含有K、Na、Mg、Ca、Fe、Mn、Cu、Co、Zn、Mo元素的无机盐。
从生物学的观点来看,微生物活细胞是个新陈代谢的动力系统,它从环境中不断地吸取营养物质,通过新陈代谢实现生长和繁殖,同时排出“废物”。而微生物的新陈代谢是在微生物自身的一系列酶的控制与催化行的。不同微生物体内的酶系统不同,其代谢方式与过程,分解和合成代谢的产物等都不同。因此可以利用一些生物化学的方法来分析微生物对营养物质和能源的利用情况及其代谢产物、代谢方式和条件等,鉴别一些在形态和其他方面不易被区别的细菌。这种利用生物化学方法检测微生物代谢状况的实验,称为细菌的生物化学反应实验,是鉴定细菌的重要依据。
一、常规生化实验的方法
(pan>)在培养物中加入某种底物与指示剂,经接种、培养后,观察培养基的颜色变化,即pH的变化。
(2)在培养物中加入试剂,观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。
(3)根据酶作用的反应特,测定微生物细胞中某种酶的存在。
(4)根据细菌对理化条件和药品的敏感,观察细菌的生长情况。
二、生化实验的注意事项
pan>)待检菌应是纯种培养物;对细行分类鉴定首要的条件是所鉴定的菌必须是纯菌。在生化特的测定中当然也必须要有此要求,以避免可能污染的其他菌干扰测定结果,而导致错误的结论。因此在实验开始时,要先通过琼板划线稀释法或厌氧滚管分离培养法对生长于培养基内分散的单个菌行观察,并结合对培养行革兰氏染色镜检的形态确认菌株的纯度。一般需要培养18~24h。
2)待检菌应是新鲜培养物;生化实验的培养基中需接种活跃生长的培养物。用新培养的菌液或斜面培养物制成菌悬浮液作为接种物为宜。
3)遵守培养时间和观察结果时间;多数生化反应培养后即可测定。对于一些生长缓慢的实验菌株则需适当延长培养时间。生化实验测定时间的确定一般可待其中的培养物生长好后再培养8~18h,如生长物未见继续增长时即行测定。
观察结果的时间多为24~48h,具体每种实验结果的观察时间要根据国标方法要求的时间观察。
4)做必要的对照实验;为确保实验结果的,应按照实验的要求,同时接种阳对照管、阴对照管或对照管。对比各实验管结果后,报告结论。
5)提高阳·检出率为提高阳检出率,少挑取2~3个待检的疑似菌落分行实验。
实验一碳源代谢实验
营养物质是微生物生命活动的物质基础,没有这个基础,生命活动无行。微生物生长时需要大量的水分,足够量的碳、氮,适量的磷,一些含硫、镁、钙、钾、钠的盐类,以及微量的铁、铜、锌、锰等元素。在微生物细胞的干物质中,碳占了50%左右,在微生物的各种营养需求中,对碳的需要量也大。在微生物生长过程中为微生物提供碳素来源的物质称为碳源(source of carbon)。碳水化合物及其衍生物括单糖寡糖、多糖、醇和多元醇)、有机酸括氨基酸)、脂肪、烃类,甚二氧化碳或碳酸盐类均可作为微生物的碳源。
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