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分子医学基础实验教程+2

分子医学基础实验教程+2

内容简介本书以构建整合型实验教

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内容简介

本书以构建整合型实验教学体系为目的,整合了细胞生物学、医学遗传学、生物化学及分子生物学的实验教学内容,并结合教师的科研,构建新的“四合一”实验教学体系,既克服了单门课程教材体系单一、内容相互割裂的缺陷,也有利于培养学生的综合分析能力与实践能力。

目录

前言

实验一光学显微镜的结构和使用

实验二光镜下细胞基本形态结构的观察及生物绘图

实验三细胞培养技术

实验四细胞核与线粒体的分级分离

实验五细胞内DNARNA及细胞骨架(微丝)观察

实验六CCK-8法检测HepG2细胞的增殖

实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制作及观察

实验八人外周血淋巴细胞G显带染色备及核型分析

实验九血清蛋白的盐析及清/球比值的测定

实验十丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争作用

实验十一血红蛋白的醋酸纤维薄膜电泳

实验十二血红蛋白的等电聚焦分离及其等电点测定

实验十三血红蛋白与核黄素的凝胶柱色谱分离

实验十四兔肝碱磷酸酶的分离纯化及比活测定

实验十五红细胞葡糖-6-磷酸脱氢酶活测定及家系分析

实验十六真核细胞线粒体基因组DNA提取

实验十七人类别鉴定(基于PCRXY染色质的方法)

实验十八G6PD基因全序列查找、引物设计及外显子12的扩增

实验十九镰状红细胞贫血的基因诊断(RFLP分析)

实验二十地中海贫血初步筛查及缺失型a地贫基因诊断

实验二十一分子清除自由基活检测

实验二十二小鼠脑组RNA提取与RT-PCR获取真核基因片段

实验二十三小鼠PKC基因的克隆、鉴定及其6His融合蛋白的大肠杆菌表达和纯化

实验二十四细胞周期、细胞增殖与凋亡检测的实验设计

实验二十五自毁容貌综合征诊断的实验设计

实验二十六G6PD缺乏症诊断的实验设计

分子医学实验报告

摘要与插图

【实验目的】

pan style="font-family: 宋体;">掌握光学显微镜的正确使用方法。

2.了解光学显微镜的构造、各部分能和保护措施。

【实验原理】

显微镜(microscope)于1590年由荷兰的詹森父子,常见的是光学显微镜(optical microscope)。光学显微镜(简称光镜)是利用光线照明使微小物体形成放大影像的仪器,广泛应用于生物科学和医学研究领域,在细胞生物学、组织学、病理学、微生物学及其他有关学科的教学研究工作中有着极为广泛的用途,是研究人体及其他生物机体组织和细胞结构的工具。

目前使用的光镜种类繁多,外形和结构差别较大,有些类型的光镜有其特殊的用途,如暗视野显微镜、荧光显微镜、相差显微镜、倒置显微镜等,但其基本的构造和工作原理是相似的。普通光镜一般有直立式和倾斜式两种,其结构可分为机械、照明和光学三部分。

光镜是如何使微小物体放大的呢?物镜和目镜的结构虽然比较复杂,但它们的作用都相当于一个凸透镜,由于被检标本是放在物镜下方pan style="font-family: 宋体;">~2倍焦距之间的,上方形成倒立的放大实像,该实像正好位于目镜的下焦点(面)之内,目一步将它放大成一个虚像,通过调焦可使虚像落在眼睛的明视距离处,在视网膜上形成一个直立的实像。

【实验器材与试剂】

普通光学显微镜、擦镜纸、香柏油或液体石蜡(石蜡油)、二甲苯。

【实验步骤】

一、光学显微镜的基本构造能

(一)机械部分

pan style="font-family: 宋体;">镜座(base)是显微镜的基座,用以支撑和稳定镜体。

2.镜柱(pillar)与镜座和镜臂相连的短柱结构。

3.镜臂(arm)为支持镜筒和镜台的弯曲状构造,是取用显微镜时握拿的部位。

镜筒直立式光镜在镜臂与其下方的镜柱之间有一倾斜关节,可使镜筒向后倾斜角度以方便观察,但使用时倾斜角度不应超过45°,否则显微镜会由于重心偏移容易翻倒。在使用临时装片时,千万不要倾斜镜臂,以免液体或染液流出,污染显微镜。

4.镜筒(body tube)位于镜臂上方的圆筒,上端装有目镜,下端连接物镜转换器。镜筒分单筒式和双筒式两种。

5.物镜转换器revolving nosepiece又称物镜转换盘,是安装在镜筒下方的圆盘状构造,可以按顺时针或逆时针方向自由旋转。其上均匀分布有34个圆孔,用以装载不同放大倍数的物镜。换用物镜时,可转动物镜转换器,但注意要将物镜转换器边缘上的缺刻和基座上的“T”形卡相扣合,使物镜与光轴合轴,否则无法观察标本。

6.载物台(stage)位于镜臂前方的方台,用以放置玻片标本。载物台中央有一通光孔,两侧有一对压片夹,用来固定标本。有的显微镜装有推片器,既可固定标本,又可前后左右移动。推片器上有纵横游标尺,可利用游标尺上的刻度作为标记,以便寻找物像

7.调焦器adjustment knob位于镜柱下方,能调节焦距,呈同心圆排列,有大小两种螺旋。大螺旋(粗调焦器,coarse adjustment)可使载物台作较大距离和较快速度的升降,适于低倍镜对焦;小螺旋细调焦器,fine adjustment则使载物台缓慢升降,用作较精细的调节,适于高倍镜和油镜的对焦。

(二)照明部分

;pan style="font-family: 宋体;">光源(light source显微镜有不带光源和自带光源两类。前者利用自然光源或人工光源照明;后者为电光源照明。电光源灯一般装在镜座里或镜座后的灯壳中,可以使用镜座后侧面的电压调节器,调节光源强度。

2.反光镜(mirror)装在镜座上、镜柱的前方,可向各个方向转动,把光线反射入聚光镜。反光镜一面是凹面镜,一面面镜。凹面镜有聚光作用,适用于较弱光和散射光面镜只有反射作用,一般用于较强光线和固定光源。有时使面镜,在视野内会出现窗外景物或窗框,这时下降聚光镜或改用凹面镜可以消除之。

3.聚光镜(condenser)又名聚光器,位于载物台通光孔下方,由一组透镜组成,可使反光镜反射的光线集中于标本上。其侧面有一聚光镜螺旋,调节时可升降聚光镜。聚光镜上升,光线增强;聚光镜下降,光线减弱。

4.光圈(diaphragm)又叫虹彩光圈或光阑,位于聚光镜下方,由许多金属薄片组成。侧面有一光阑小柄,拨动它可使光圈扩大或缩小,以调光量。

(三)光学部分

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